胰酶浓度:zui常用的是0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。
商品化胰酶溶液需要用干冰运输,在运输过程中,胰酶溶液中的二氧化碳与干冰挥发的二氧化碳可能会极少部分的气体交换,导致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚红作为PH值指示剂,因此胰酶PH的变化是肉眼可观察到的。由干冰运输过程中导致的PH值的变化很小,PH值会从7.2-8.0变化到了6.8左右,在PH值7.2-8.0的时候,溶液呈淡红色;PH值6.8左右时呈淡黄色的。因此胰酶颜色的变化是由PH值的变化引起,归因于使用干冰运输。这种颜色的变化是行业普遍现象,在不同供应商的胰酶产品都会出现。
对于胰酶呈黄色的问题,不同品牌也都对此现象进行了测试实验。变色的胰酶同样能很好的用于细胞的解离,请放心使用。
细胞消化时,如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是没有问题的。
如果消化液中含有胰酶和EDTA,去除。EDTA是一种化学螯合剂,主要作用在于能螯合Ca、Mg离子,使细胞分离。但EDTA不能被血清中和,消化后要*清洗去除,否则细胞易脱壁。胰酶胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率,所以常二者合用。
GIBCO 25200-072 胰酶可在-20℃下保存一年。随着时间延长,胰酶的消化能力减弱。由于胰酶自身也是一种蛋白,胰酶也会自己剪切自己,建议胰酶不要反复冻融,拿到手中的大瓶胰酶进行分装使用。胰酶可分装冻存,在使用前从-20℃冰箱取出。尽量避免在4℃长期保存。
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