1、sigma试剂血清来源 :可从--各地收集胎牛血清,但必须符合其质量标准和美国农业部进口要求;
2、血清的收集:必须符合工业生产的标准,低温采集,一次分离,分离后立即混合冻存;
3、血清的制备:超低IgG胎牛血清、透析血清、γ-射线辐照;
4、除菌过滤:0.22μm和0.1μm滤膜过滤;
5、成品分装:根据需要分装成不同规格。
牛血清的使用所产生的常见问题
(一)由于血清营养丰富,贮存条件特殊,因此在贮存和使用过程中容易产生以下问题:
1、改变培养液的pH值
牛血清的pH理论值为7.0~8.0,培养基在加入规定量的试剂后(即达到细胞生长所需要的渗透压),再加入10%的牛血清,一般会使培养液的pH值发生改变。因此在使用过程中应注意pH的变化,如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH到所需值。
2、由于血清的营养成分丰富,非常适合细菌、真菌和支原体等生长。国产血清大部分采用手工分装,因此容易把微生物带入而使得血清被污染。使用前如果没有及时发现,将会把污染物带入正在培养的细胞中,而使得细胞不能正常生长。
3、血清在贮存解冻过程中会产生沉淀,这是由于血清中含有大量脂蛋白、纤维蛋白及多肽类物质,在-15℃冷冻保存解冻后就会自然形成沉淀,随着保存时间的延长,沉淀量会增加。因此在融化血清时一般应先在4℃放置使之解冻,然后放在室温使血清*融化,以避免沉淀的增加。添加血清时应避免把沉淀加入培养液,否则由于沉淀的存在会使得所培养的细胞产生大量黑点,或者细胞表面将会覆盖一层油状物质,影响细胞的正常生长。为减少血清的损失,可以把有沉淀的血清收集起来进行离心处理,将上清液加入培养液使用(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。
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